Logo GenDocs.ru

Поиск по сайту:  


Загрузка...

Лабораторные работы по биохимии - файл Практикум.doc


Лабораторные работы по биохимии
скачать (47.4 kb.)

Доступные файлы (1):

Практикум.doc362kb.10.03.2005 08:24скачать

содержание
Загрузка...

Практикум.doc

1   2   3   4   5   6
Реклама MarketGid:
Загрузка...
^

ТЕМА 5. ХИМИЯ И ОБМЕН УГЛЕВОДОВ



Лабораторная работа № 6.

Определение концентрации глюкозы в крови ферментативным методом (с помощью прибора контроля уровня глюкозы в крови ONE TOUCH BASIC PLUS)


Принцип метода: Система контроля уровня глюкозы в крови ^ ONE TOUCH BASIC PLUS предназначена для определения уровня глюкозы в цельной крови в домашних и клинических условиях. Система включает в себя прибор ONE TOUCH BASIC PLUS, тест-полоски, ланцеты и флакон с контрольным раствором.

Тест основан на глюкозооксидазной реакции, специфичной для глюкозы. На любые другие сахара тест не реагирует. После нанесения крови на тест-полоску компоненты последней реагируют с кровью в следующей последовательности:

Глюкозооксидаза


Глюкоза + 2Н2О + О2 --------------------------> Глюконовая кислота+ Н2О2



Пероксид водорода реагирует с хромогеном (4-аминоантипирин) с образованием красителя хинонимина:

Пероксидаза


Н2О2+ 4-Аминоантипирин + ГБС ------------------------> Хинонимин + 4Н2О



Интенсивность окраски пятна при длине волны 505 нм прямо пропорциональна концентрации глюкозы в нем.
^ Линейность метода: до 33,3 ммоль/л.

Норма:

Цельная кровь – 3,3-5,5 ммоль/л (18-25С);

Сыворотка – 3,8-6,1 ммоль/л.
Оборудование и реагенты:

  1. прибор ^ ONE TOUCH BASIC PLUS;

  2. тест-полоски;

  3. ланцеты;

  4. Стандарт (контрольный раствор 4,8-6,8 ммоль/л).


Проведение анализа


  1. Включить прибор. На экране автоматически появится результат предыдущего теста.

  2. Установить код нажатием кнопки «С». Номер кода на приборе должен совпадать с номером кода на флаконе с тест-полосками.

  3. Ввести тест-полоску в прибор до упора.

  4. Проколоть палец с помощью нового стерильного ланцета.

  5. Аккуратно нанести каплю крови на зону теста.

  6. Получить точный результат через 45 секунд (дата, время, уровень глюкозы в ммоль/л).


Хотя система ^ ONE TOUCH BASIC PLUS требует малого количества крови, очень важно, чтобы капля крови была достаточно большой и закрывала полностью зону теста.

Данный прибор не предназначен для диагностики сахарного диабета и для измерения уровня глюкозы в крови у новорожденных детей в возрасте до 4 недель.

Если результаты анализа ниже 3,3 ммоль/л, на экране появится надпись «опасно врач» – следует немедленно принять меры вместе с лечащим врачем при гипогликемии.

Если результат выше 33,3 ммоль/л, на экране прибора появится надпись «НI опасно врач», что указывает на недопустимо высокую концентрацию глюкозы в крови (острая гипергликемия) и требуется немедлнное обращение к врачу.
Для проверки правильности показаний прибора (минимум 1 раз в неделю) можно использовать проверочную тест-полоску или контрольный раствор:


^ Контроль с помощью проверочной тест-полоски

Контроль с помощью контрольного раствора

1. Включить прибор

1. Включить прибор

2. Ввести проверочную полоску стороной 1 вверх

2. Убедится, что номер на экране совпадает с номером на флаконе с тест-полосками. Вставить тест-полоску.

3. При появлении записи на экране «Нанеси пробу» извлечь проверочную полоску

3. Хорошо встряхнуть флакон с контрольным раствором.

4. Когда на экране прибора появится надпись «введи стор.2», ввести проверочную полоску стороной 2.

4. Нанести каплю контрольного раствора на зону теста

5. Прибор покажет результат.

5. Прибор покажет результат через 45 секунд.


Клинико-диагностическое значение: Увеличенные уровни глюкозы в крови (гипергликемия) характерны для сахарного диабета, гиперфункции щитовидной железы, гипофиза и надпочечников.

Концентрация глюкозы в крови ниже нормы (гипогликемия) наблюдается при инсулин-секретирующих опухолях, микседеме, гипофункции гипофиза, гипофункции надпочечников, и в случае введения пациенту сверхбольшой дозы инсулина.


Лабораторная работа № 7.

Определение активности лактатдегидрогеназы в сыворотке крови кинетическим методом


Принцип метода: Лактатдегидрогеназа (ЛДГ) в сыворотке катализирует окисление молочной кислоты до пировиноградной кислоты с одновременным восстановлением НАД+ до НАДН.


^ ЛДГ

L-Лактат + НАД+ ----------- Пируват + НАДН + Н+



Скорость увеличения оптической плотности раствора прямо пропорциональна активности ЛДГ в пробе и измеряется спектрофотометрически при длине волны 340 нм.
^ Линейность метода: до 800 Е/л.

Норма: мужчины – 80-285 Е/л (37С);

женщины – 103-227 Е/л (37С).
ЛДГ в негемолизированной сыворотке следует определять сразу после взятия крови. ЛДГ в сыворотке сохраняет стабильность при комнатной температуре (18-25С) в течение 2-3 дней. Не замораживать и не прогревать сыворотку до 37С!, поскольку при этом термолабильные изоэнзимы ЛДГ могут дезактивироваться.
Оборудование и реагенты:

  1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 340 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37С;

  2. Секундомер;

  3. Автоматические пипетки на 25 мкл и 1000 мкл;

  4. Сыворотка крови;

  5. Дистиллированная вода;

  6. Рабочий реагент (L-лактат – 50 ммоль/л, НАД+ – 7,0 ммоль/л, ТРИС-буфер (рН 9,00,1)).

Рабочий реагент годен для применения, если его оптическая плотность не выше 0,5 ед.опт.плотн. при длине волны 340 нм.
^ Проведение анализа
Перед проведением анализа рабочий реагент следует прогреть до температуры измерения (37С).


^ Добавить в кювету

Опытная проба

1. Сыворотка

25 мкл

2. Рабочий реагент

1 мл


Перемешать содержимое пробирки и включить секундомер. Измерить оптическую плотность пробы против дистиллированной воды при длине 340 нм ровно через 1 мин. Повторить измерение 3 раза с интервалом 1 мин. Рассчитать изменение оптической плотности за каждую минуту, а затем вычислить среднее измерение оптической плотности в минуту (о.п./мин).
Расчет
Расчет по фактору активности ЛДГ проводят по формуле:


о.п./мин  1,025  1000

АЛДГ (Е/л) = ----------------------------------- = о.п./мин  6592,

6,22  0,025  1,0


где о.п./мин – среднее изменение оптической плотности в минуту;

1,025 – общий объем раствора в кювете;

1000 – коэффициент перевода мл в л;

6,22 – коэффициент миллимолярного поглощения НАДН;

0,025 – объем сыворотки в мл;

1,0 – длина оптического пути.

При внесении каких-либо изменений в перечисленные параметры фактор следует пересчитать. Если активность ЩФ превышает 800 Е/л (точка вне зоны линейности калибровочного графика), анализируемую сыворотку следует развести 1:1 физиологическим раствором и повторить измерение, а полученный результат расчета умножить на 2.
Клинико-диагностическое значение: Активность ЛДГ в сыворотке крови повышается при различных заболеваниях (инфаркт миокарда, лейкозы, заболевания почек, инфекционный мононуклеоз, повреждение паренхимы печени, мышечные дистрофии, опухолевые новообразования).

Из-за отсутствия органной специфичности ЛДК в диагностике чаще применяют определение активности ее изоферментов, чем общую активность ЛДГ.

Общая активность ЛДГ в сыворотке при инфаркте миокарда достигает максимума через 24-36 часов после начала болевого приступа, но приходит к норме медленнее, по сравнению с КК и АСТ, на 8-10 день.

Увеличение активности в сыворотке изофермента ЛДГ1 специфично для поражения миокарда. Для заболеваний скелетной мускулатуры характерно повышение изофермента ЛДГ5. Заболевания печени сопровождаются разными изоферментными спектрами ЛДГ: для острого гепатита характерно резкое увеличение ЛДГ5 и ЛДГ4 и уменьшение ЛДГ1 и ЛДГ2; при циррозе увеличена активность ЛДГ5; при холецистите активность ЛДГ5 увеличена незначительно.

В опухолевых тканях преобладают изоформы ЛДГ5 и ЛДГ4. При лейкозах обнаружена корреляция активности ЛДГ2 и ЛДГ3 от количества незрелых клеток.
1   2   3   4   5   6



Скачать файл (47.4 kb.)

Поиск по сайту:  

© gendocs.ru
При копировании укажите ссылку.
обратиться к администрации
Рейтинг@Mail.ru