Logo GenDocs.ru

Поиск по сайту:  


Загрузка...

Лабораторные работы по биохимии - файл Практикум.doc


Лабораторные работы по биохимии
скачать (47.4 kb.)

Доступные файлы (1):

Практикум.doc362kb.10.03.2005 08:24скачать

содержание
Загрузка...

Практикум.doc

1   2   3   4   5   6
Реклама MarketGid:
Загрузка...


где Аоп и Аст – оптическая плотность опытной и стандартной проб,

соответственно;

Сст – концентрация стандарта.

Если концентрация альбумина превышает 60 г/л (точка вне зоны линейности калибровочного графика), анализируемый образец (сыворотка или плазма) следует развести 1:1 физиологическим раствором и повторить измерение, а полученный результат расчета умножить на 2.
Клинико-диагностическое значение: Гиперальбуминемия наблюдается при тех же состояниях, что и гиперпротеинемия.

Гипоальбуминемия наступает при больших потерях белка, связанных с кровотечением, нарушением синтеза белка в печени и усилением процессов его распада.

Лабораторная работа № 18.

Определение концентрации С-реактивного белка в сыворотке крови иммунотурбидиметрическим методом


Принцип метода: С-реактивный белок (СРБ) сыворотки взаимодействует с моноспецифическими антителами, присутствующими в избытке в реакционной смеси с образованием преципитата, усиленного ПЭГ.

Турбидиметрическое определение концентрации СРБ основано на регистрации оптической плотности анализируемой пробы при длине волны 340 нм.
^ Диапазон измерения метода: 8-150 мг/л.

Норма: до 10 мг/л (37С);
СРБ в сыворотке сохраняет стабильность при замораживании (-20С) в течение 6 месяцев.
Оборудование и реагенты:

  1. Спектрофотометр с термостатированной кюветой, длина волны 340 нм, длина оптического пути 1 см; температура реакции 37С;

  2. Секундомер;

  3. Автоматические пипетки на 75 мкл, 200 мкл и 1000 мкл;

  4. Сыворотка крови негемолизированная / плазма;

  5. СРБ-буфер (ТРИС-буфер 0,01 моль/л, содержащий 5% ПЭГ);

  6. Антисыворотка против СРБ;

  7. Калибровочные растворы №№ 1-5 с указанной на этикетках концентрацией СРБ;

  8. Физиологический раствор (хлорид натрия 0,9%).

Антисыворотка разводится в 3 раза (1:2) СРБ буфером с ПЭГ (полиэтиленгликолем). Разведенная антисыворотка годна для применения при условии хранения его при температуре 2-8С в течение 30 дней.
^ Проведение анализа
Перед проведением анализа реагенты следует прогреть до температуры измерения (37С).


^ Добавить в кювету


Холостая проба

Опытная проба

Стандартная проба

1. Стандарт

--

--

75 мкл

2. Сыворотка

--

75 мкл

--

3. Буфер для СРБ

1 мл

1 мл

1 мл

Перемешать в течение 15 с. Инкубировать 10 минут при температуре 37С. Измерить оптическую плотность холостой пробы.

4. Антисыворотка против СРБ

--

200 мкл

200 мкл


Перемешивать содержимое пробирок в течение 15 секунд. Измерить оптическую плотность проб при длине 340 нм ровно через 5 минут после добавления антисыворотки.
Расчет
Расчет концентрации СРБ проводят по нелинейной калибровочной кривой:


стандар-та

Оптическая плотность при 340 нм

стандар-та

Оптическая плотность при 340 нм

Стандарт 1




Стандарт 4




Стандарт 2




Стандарт 5




Стандарт 3











Если концентрация СРБ пробы выше самой высокой концентрации стандартного раствора СРБ (точка вне рабочей зоны калибровочного графика), анализируемую сыворотку следует развести 1:4 физиологическим раствором и повторить измерение, а полученный результат умножить на 5.
Клинико-диагностическое значение: СРБ – это 2-глобулин и компонент неспецифического иммунного ответа на ранних стадиях проникновения антигена в организм. СРБ способствует удалению из крови эндогенных веществ, образующихся в результате разрушения клеток организма (полисахариды, гликопротеины, нуклеиновые кислоты, фосфатидилхолин и пр.).

СРБ относится к белкам острой фазы. При тяжелых воспалениях синтез его в печени возрастает более, чем в тысячу раз. Уровень СРБ в крови увеличивается в течение 6-10 часов в реакциях острой фазы (разрушение тканей, воспаление).

Концентрация СРБ у курильщиков может достигать 25 мг/л. После хирургического вмешательства (если нет осложнений) СРБ держится в течение 2 дней на уровне до 150 мг/л, а затем возвращается в норму.

Плохим прогностическим признаком является СРБ  200 мг/л на протяжении 10 дней и более после хирургического вмешательства. За 1-2 дня до летального исхода СРБ заметно увеличивается.

Определение концентрации СРБ используют для отличия бактериальных инфекций от вирусных. Концентрация СРБ до 50 мг/л обычно наблюдается при легких вирусных инфекциях и местных бактериальных инфекциях; 50-150 мг/л – в основном при бактериальных инфекциях и в отдельных случаях при тяжелых вирусных инфекциях;  150 мг/л – при тяжелых бактериальных инфекциях.

Максимальная концентрация СРБ может доходить до 400 мг/л у новорожденных и примерно до 850 мг/л у взрослых.

Лабораторная работа № 19.

Определение компонентов мочи с помощью диагностических полосок (HUMAN-Test Combina)


Принцип метода: В основе работы тест-полосок лежат методы сухой химии. Полоски предназначены для полуколичественного определения компонентов мочи по результатам цветных и ферментативных реакций в толще полоски.

Интенсивность окраски тестовой области полоски сравнивается с цветовой шкалой для каждого компонента.
Оборудование и реагенты:

  1. Тест-полоски;

  2. Свежесобранная моча;

  3. Цветовые шкалы для показателей на этикетке контейнера для тест-полосок.



Проведение анализа


  1. Погрузить полоску в мочу на 1-2 секунды так, чтобы намочить все тестовые области.

  2. Удалить излишек мочи с полоски проведя ею по краю емкости с мочой.

  3. Держать полоску горизонтально в течение 1-2 минут.

  4. Сравнить цвета всех тестовых областей полоски с соответствующими цветовыми шкалами на этикетке контейнера. Сравнение должно проводится не позднее, чем через 2 минуты! Цвет на краях тестовых областей не учитывается.



Компо-нент мочи

Принцип метода

Результат

Норма

Клинико-диагностическое значение

^ 1. Удель-ный вес

Ионный обмен между электролитом тестовой области и ионами, растворенными в моче, что вызывает изменение окраски индикатора .

^ Сине-зеленый цвет для низкой ионной силы до желто-коричневого цвета для концентрированной мочи.

1,018 для утренней мочи.

Удельный вес зависит от концентра-ции растворен-ных в моче веществ.

Очень высокие и низкие цифры плотности для утренней мочи требуют установления причины. Низкий удельный вес обычно связан с полиурией, а высокий чаще бывает при глюкозуриях.

2. Нитриты

Реакция Грисса: сульфаниламид стетрагидробензо-хинолином реагируют с продуктами метаболизма энтеробактерий.

^ Любая степень окраски в оранжево-розовый цвет свидетельствует о присутствии не менее 105 микроорганизмов в 1 мл мочи

103 микроорга-низмов в мл мочи

Определенная степень бактериурии указывает на наличие воспалительного процесса. Отрицательный результат не исключает бактериурии и может говорить об инфицировании бактериями, не содержащими нитрат-редуктазы

3. рН

Двойной индикатор: метиловый красный и бромтимоловый синий

Диапазон окраски от оранжевого через желтый и зеленый до синего, что соответствует рН от 5 до 9.

рН свежей мочи находится в диапазоне 5-6

При смешанной пище в организме образуются кислые продукты обмена. Кислотность увеличивается при сахарном диабете, туберкулезе почек и почечной недостаточности. Щелочная реакция мочи характерна при рвоте, приеме щелочных лекарств, хронической инфекции мочевыводящих путей

^ 4. Белок/ альбумин

Сдвиг рН индикатора тетрабромфеноло-вого синего, чувствительный к альбумину

При выраженной протеинурии окраска соответствует содержанию белка  0,3 г/л

Ниже порога чувстви-тельности теста

^ Белок в моче появляется при усиленном распаде белка тканей, при гемолизе, при патологии почек, при воспалении мочевыводящих путей.

5. Глюкоза

^ Ферментативный глюкозооксидазный метод, специфичный для глюкозы

Зеленоватый оттенок тестовой области свидетельствует о небольших количествах глюкозы в моче

^ Глюкоз

урия до 0,2 г/л не обнаружи-вается

Появление глюкозы в моче зависит от ее концентрации в крови, от фильтрационной способности почек и от реабсорбционных процессах в канальцах нефрона. Глюкоза появляется также при раздраждении ЦНС, гипертиреозе, патологии печени. Глюкозурия может иметь алиментарную и лекарственную причины.

6.Кетоны

Взаимодействие ацетона и ацетоуксусной кислоты с нитропруссидом натрия в щелочной среде (тест Легаля)

^ При наличии кетонов образуется комплекс фиолетового цвета. Красное окрашивание может быть вызвано наличием фталеиновых соединений

Отсутству-ют в моче

Появление кетонов в моче может быть вызвано физиологическим стрессом (голодание, беременность, спорт), но чаще наблюдается при диабете и свидетельствует о неправильном пищевом режиме.

7. Уроби-линоген

Реакция связывания уробилиногена стабилизированными солями диазония

^ Желтая окраска тестовой области с последующим переходом в зелено-голубой цвет

1,7-30 мкмоль/л

Паталогическая концентрация уробилиногена – характерный симптом поражения паренхимы печени (гепатиты, цирроз), гемолитических состояний и заболеваний кишечника (энтериты, запоры, кишечная непроходимость). Полное отсутствие говорит о нарушении поступления желчи в кишечник.

8. Билиру-бин

Связывание билирубина со стабилизированны-ми солями диазония в сильнокислой среде

^ Желто-оранжевая окраска тестовой области

Отсутству-ет в моче

Следовые количества билирубина свидетельствуют о ранних заболеваниях печени и нарушении оттока желчи и требуют дальнейшего обследования.



Клинико-диагностическое значение: Тест-полоски предназначены для скрининговых исследований мочи в целях диагностики диабета, заболеваний печени, гемолитических болезней, урогенитальной и почечной патологии, а также нарушений метаболизма и кислотно-щелочного баланса.
1   2   3   4   5   6



Скачать файл (47.4 kb.)

Поиск по сайту:  

© gendocs.ru
При копировании укажите ссылку.
обратиться к администрации
Рейтинг@Mail.ru