Logo GenDocs.ru

Поиск по сайту:  


Загрузка...

Доронин А.Ф., Шендеров Б.А., Изотова Т.И. Методические указания к лабораторным работам Методы микробиологического контроля продуктов детского и функционального пита - файл n1.doc


Доронин А.Ф., Шендеров Б.А., Изотова Т.И. Методические указания к лабораторным работам Методы микробиологического контроля продуктов детского и функционального пита
скачать (186 kb.)

Доступные файлы (1):

n1.doc186kb.23.01.2013 15:27скачать

Загрузка...

n1.doc

Реклама MarketGid:
Загрузка...



МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
Московский Государственный Университет пищевых производств

А.Ф. Доронин, Б.А. Шендеров, Т.И. Изотова


Методические указания

к лабораторным работам «Методы микробиологического

контроля продуктов детского и функционального питания»

по курсу: «Обеспечение безопасности и качества продуктов детского и функционального питания»

(для студентов специальности 270800)
Утверждено

методической

комиссией
Москва, 2003 г.

Введение.
Курс «Обеспечение безопасности и качества продуктов детского и функционального питания» предусматривает выполнение цикла лабораторных работ по методам исследований (испытаний) качества продуктов детского и функционального питания по микробиологическим показателям безопасности для здоровья человека.

Целью выполнения этих работ является более глубокое изучение методов контроля по микробиологическим показателям безопасности, проводимых в порядке производственного контроля, государственного и ведомственного санитарно-эпидемиологического надзора, а так же при испытаниях указанной продукции в целях сертификации соответствия.

Для оценки качества продуктов детского и функционального питания и их компонентов по микробиологическим показателям безопасности за основу авторами приняты соответствующие стандарты и нормативные документы.

В методических указаниях представлены современные методы микробиологического контроля продуктов детского и функционального питания и их компонентов, применяемые в лабораториях предприятий, организаций и учреждений, осуществляющих производственный контроль качества при разработке новых видов продуктов детского, лечебного, функционального питания и их компонентов, постановке их на производство и в процессе промышленного выпуска, в лабораториях организаций Госсанэпиднадзора Российской Федерации и ведомственных санитарно-эпидемиологических служб федеральных органов исполнительной власти, а также в лабораториях иных организаций, аккредитованных на право проведения испытаний указанной продукции для целей ее сертификации.

В настоящих методических указаниях авторами предложен для студентов краткий компендиум сведений, полезных при идентификации бактерий.



  1. Требования к проведению микробиологического контроля.


В продуктах детского и функционального питания, а также их компонентах нормируется количество КМАФАМ, микроорганизмов порчи пищевых продуктов – дрожжей и плесневых грибов и В. сеreus в 1 г. продукта, а их содержание выражается количеством колониеобразующих единиц – КОЕ/г.

Другие группы микроорганизмов: БГКП (колиформы), Е. coli,

S. aureus, Salmonella в определенной массе продукта не допускается.

В продуктах содержащих специфическую микрофлору КМАФАМ не определяют, так как подсчет бактерий в таких случаях не может быть показательным.

Контроль специфической микрофлоры кисло-молочных продуктов, 3продуктов функционального питания (ФП), содержащих данную микрофлору, осуществляется в соответствии с методами по определению жизнеспособных клеток бифидо- и/или ломбобактерий, ацидофильных бактерий.

Закваски контролируют в соответствии с действующими нормативными документами, те есть на отсутствие условно- патогенных и патогенных микроорганизмов в определенном объеме продукта: Saureus – в 10 см3 закваски, Salmonella – в 100 см3 закваски.

Микробиологический контроль включает способы дифференциации сапрофитных микроорганизмов рода Erwinia от БГКП, при исследовании продуктов на зерновой основе по выявлению БГКП (колиформы).

Стерилизованные продукты должны отвечать требованиям промышленной стерильности.

При обнаружении повышенного содержания КМАФАМ в продуктах детского питания определяется количественное содержание и энтерококков.

В производственных лабораториях предприятий по выпуску продуктов детского питания, микробиологическому контролю подлежит каждая партия готового продукта и компонентов на содержание КМАФАМ, БГКП, дрожжей и плесневых грибов. А контроль за содержанием стафилококков и B. сereus в сухих продуктах и их компонентах проводится не реке одного раза в месяц.

Контроль на отсутствие патогенных микроорганизмов, в том числе Salmonella проводят аккредитованные лаборатории Центров Госсанэпиднадзора.


  1. Методы отбора проб сырья, компонентов и готовой продукции.



    1. Отбор проб осуществляется в соответствии с ГОСТ 26809.«Молоко и молочные продукты. Отбор проб и подготовка к испытанию»;

ГОСТ 13928 «Молоко и сливки заготовляемые. Правила приемки,

методы отборы и подготовка проб к анализу»;

ГОСТ 9225 «Молоко и молочные продукты. Методы микробиологического анализа»;

ГОСТ 26668 «Продукты пищевые и вкусовые. Порядок отбора проб для микробиологических анализов»;

ГОСТ 26972 «Зерно, крупа, мука, только для продуктов детского питания. Методы микробиологического анализа».

МУК 4.2.577 «Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов».

    1. Посуду с пробой или пробу в потребительской упаковке снабжают этикеткой на которой указывают:

- номер пробы;

- наименование продукта;

- номер и объем партии;

- дату и час отбора пробы.

Обозначения действующей нормативной документации по которой вырабатывают продукт.

    1. Микробиологические анализы продукта проводят не более чем через 4 часа с момента отбора проб.

    2. Пробы должны храниться до начала исследований при температуре продукта не выше 60С.



  1. Подготовка проб к анализу.



Отобранные средние пробы сухих продуктов для детского, функционального питания и их компонентов тщательно перемешивают, взвешивают навеску продукта на стерильной чашке Петри, затем переносят ее в стерильную колбу или другую стерильную посуду.

Отобранные средние пробы консервов для детского и функционального питания тщательно перемешивают. Перед вскрытием консервной тары с продуктом крышку протирают ватой, смоченной спиртом. Открывают крышку фламбированным консервным ножом. После снятия крышки края консервной тары вновь фламбируют.

Отобранные пробы молока, сливок и других жидких продуктов перед исследованием тщательно перемешивают.

Пробы кисло-молочных продуктов и напитков, а также заквасок перед исследованием перемешивают и нейтрализуют каждые 10 см 3 исследуемого продукта 1,0 см3 стерильного раствора двууглекислого натрия с массовой концентрацией 100 г/дм3, для сухих кисло-молочных продуктов нейтрализуют каждые 10 см3 первого разведения продукта, затем все тщательно перемешивают.

Пробы сгущенных продуктов и их компонентов перемешивают стерильной ложкой, затем взвешивают стерильную сухую колбу и в нее помещают 10 г продукта.

Навеску сыра, творога, творожных изделий и пастообразных продуктов взвешивают в стерильной чашке Петри, после чего переносят в стерильную или фламбированную ступку, прикрытую крышкой от чашки Петри, тщательно растирают и нейтрализуют каждые 10 см 3 исследуемого продукта 1,0 см3 стерильного раствора двууглекислого натрия с массовой концентрацией 100 г/дм3.

Пробу топленого масла или молочного жира расплавляют в водяной бане при температуре от 40 до 450С и перемешивают до получения однородной эмульсии.


4. Приготовление разведений продуктов для посева
Перед посевом готовят десятикратные разведения продукта в стерильных раствора разбавленного фосфатного буфера, изотонического раствора натрия хлорида (физраствор).

Для приготовления разведений готовят необходимые стерильные материалы и посуду в соответствии со спецификой анализа исследуемого продукта: пробирки с 9,0 см3 или колбы с 90,0 см3 одного из растворов, используемых для приготовления разведений. Из жидких проб продукта отбирают стерильной пипеткой 10,0 см3 и вносят в 90,0 см3 одного из стерильных растворов, используемых для приготовления разведений, взбалтывают в течение 5 мин круговыми движениями до более полного растворения. При этом пипетку промывают до 10 раз раствором этого же продукта до верхнего уровня ,имеющейся на ней делений. Таким образом получают первое разведение 1:10.

Из сухих проб продукта (сухие молочные продукты , сывороточные белки концентратов, казецитов и других компонентов, а так же пастообразных продуктов) отбирают навески по 10г, и переносят в колбу с 90,0 см3 одного из стерильных растворов, используемых для приготовления разведений, подогретых от 40 до 45 0С и взбалтывают в течение (41) мин круговыми движениями до возможно более полного эмульгирования. Получают разведение 1:10.

При разведении продуктов не на молочной основе, навески по 1 г переносят в пробирку, добавляя 9,0 см3 физраствора. Для получения однородной взвеси продукта допускается перемешивание в аппарате для встряхивания жидкостей в течение (61) мин, избегая намокания пробок.

Из первого разведения продукта стерильной пипеткой берут 1,0 см3 и переносят в пробирку, содержащую 9,0 см3 стерильного раствора, используемого лоя приготовления разведений, перемешивают осторожно, набирая и выдувая из пипетки по 5-10 раз. Получают второе разведение продукта 1:100. Последующие разведения в зависимости от предполагаемого обсеменения продукта 1:1000, 1:10000 и т.д. готовят аналогично.

Для приготовления каждого разведения берут новую стерильную пипетку, Вводят пипетку в пробирку не более, чем на 2-3 см ниже поверхности взвеси.

Время от момента приготовления разведений до посева не должно превышать 20-30 мин. Перед посевом все разведения осторожно встряхивают. При посеве на чашки Петри или в пробирки посевной материал вносят от большего разведения к меньшему. В этом случает пользуются одной пипеткой.

Для приготовления разведений сухих молочных каш для детского питания используют надосадочную жидкость первого разведения продукта после отстаивания его в течение 2-3- мин.


  1. Методы анализа продуктов детского и функционального питания.


Контроль микробиологического качества и безопасности продуктов детского и функционального питания выделяет следующие группы микроорганизмов: КМАФАМ – общее количество мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов, бактерий группы кишечных палочек (БГКП) колиформы, Е. coli, S. aureus, B. cereus, бактерии рода Salmonella, дрожжи и плесневые грибы.

В кисло-молочных продуктах, а также продуктах функционального питания, содержащих в своем составе пробиотическую микрофлору проводится контроль за количеством технологически значимой микрофлоры: молочно-кислые бактерии, бифидобактерии.

При проведении посевов на индикаторные, условно-патогенные и патогенные микроорганизмы должны быть использованы контрольные культуры соответствующих микроорганизмов, которые изучают в тестах идентификации параллельно с культурами, выделенными из исследуемых образцов продуктов.


Лабораторная работа № 1
Определение общего количества мезофильных аэробных и факультативно-анаэробных микроорганизмов.


МАФАМ – представлены микроорганизмами, оптимальная температура роста которых составляет 25-400С в условиях доступа кислорода, либо его отсутствия.

Показателем санитарно – гигиенического состояния продукта является общая обсемененность МАФАМ, то есть общая численность микроорганизмов.

В настоящее время в качестве тест-бактерий принимают стрептококки, энтерококки и энтеровирусы.

Семейство Streptococcaclae.

Род Streptococcus.
Клетки от сферических до овальных, менее 2 мкм в диаметр (размеры варьируются в зависимости от вида). Встречаются в парах или цепочках, когда растут в жидкой среде. Грамположительны. Метаболизм бродильный, преобладающий конечный продукт при сбраживании глюкозы – молочная кислота. Гомоферментативные. Некоторые виды сбраживают органические кислоты (яблочную, лимонную) и аминокислоты (серин, аргинин).

Факультативные анаэробы. В присутствии кислорода может накапливаться перекись водорода. Температурный оптимум 370С. Максимальная и минимальная температуры могут варьироваться в зависимости от вида.

Виды стрептококков: S. pyogenes (типовой вид), S. equisimilis, S. bovis, S. mitis, S. avium, S. lactis, S. cremoris, S. acidominimus, S. thermophilus и другие виды.

Энтерококки – грамположительные кокки, в мазках из жидких сред располагаются в виде коротки или длинных цепочек; в плотных – в виде скоплений кокков. Растут в бульонах с 40% желчи и при активной кислотности (9,9 ±0,3) ед. рН, не разлагают перекись водорода, так как не вырабатывают фермент каталазу. Обнаружение их в продукте свидетельствует о контроле за технологией процессов, проведения санитарной обработки технологического оборудования.

При санитарно – гигиенической характеристике продукта, численность микроорганизмов (МАФАМ) в продукте выражают в КОЕ/г (см3) с указанием соответствия или несоответствия продукта микробиологическому нормативу.


Сущность метода.
Метод основан на количественном подсчете колоний микроорганизмов, вырастающих на плотном питательном агаре при температуре (30±1)0С в течение 72 часов.
Методика определения.
Для определения КМАФАМ выбирают те разведения, при посеве которых на чашках вырастает не менее 15 и не более 300 колоний.

При посеве продуктов, не требующих разведения, учитывают все выросшие на чашках колонии (то есть не менее 15).
Посев на чашки Петри.
Перед посевом чашки маркируют. На дне чашки по стеклу ставят номер образца, разведение и дату.

По 1 см3 соответствующего разведения или цельного продукта вносят в две чашки Петри для параллельного определения. Затем наливают в каждую чашку по 15-20 см3 расплавленной питательной среды, температурой 450С. Края колб с питательной средой перед каждой заливкой фламбируют в пламени спиртовки. После заливки среды чашки тщательно перемешивают путем вращательного покачивания для равномерного распределения посевного материала и оставляют для остывания.
Инкубация.
После застывания среды чашки Петри переворачивают крышками вниз и помещают в таком виде в термостат при (30±1)0С на 72 часа.
Учет и обработка результатов.
Поместив чашки вверх дном на темном фоне, подсчитывают на каждой количество выросших колоний.

Если инкубированные чашки с разведением 1 : 10 не содержат колоний, то результат записывают, как > 1 · 101 КОЕ/см3 . Если на каждой из двух параллельных чашек с разведением 1:10 содержится меньше, чем 15 колоний, то результат записывают как n · 10, где n – выросших колоний.

Если колоний больше 15, то подсчитывают на обеих чашках соответствующего разведения и вычисляют среднее арифметическое значение и умножают его на соответствующее разведение продукта.

Пример:

Разведение 1:10.

1 чашка 185 колоний

2 чашка 203 колонии
185 + 203 = 388 : 2 = 194 результат округляют до 200

200 · 10 = 2000 = 2,0 · 103 КОЕ/г (см3).


Запись в лабораторном журнале.
Партия № 1/с – 2501 от 18.06.03 Дата _________


Наименование продукта

НД

Микробиологический норматив МАФАМ

КОЕ/г(см3) не более

Номер и масса пробы

Результаты исследований МАФАМ

КОЕ/г (см3)

Примечание

1

2

3

4

5

6

Гречневая каша с яблоком для детей с 4 мес. Не требующ. варки. «Хайнц»

ТУ 9197-009-28112739-97

50000

№1 – 10 гр.

60000

Без термической обработки, восстановленная при 500С.

Продукт соответствует нормативу


Вопросы для самопроверки:


  1. Какие организмы относят к санитарно – показательным?

  2. Характеристика МАФАМ. В каких единицах измерения выражают результат численности МАФАМ?

  3. Какие тест – бактерии приняты для определения МАФАМ?

  4. Сущность метода определения?

  5. Режимы инкубации?


Бактерии группы кишечных палочек (колиформные бактерии).
В соответствии с международной номенклатурой к бактериям группы кишечных палочек (БГКП) семейства Enterobacteriaclae отнесены грамотрицательные, не образующие спор грамотрицательные палочки, подвижные или не подвижные, не кислоустойчивые, факультативные анаэробы, сбраживающие лактозу с образованием кислоты и газа при температуре равной (37±1)0С в течение 24-48 часов. В основном являющиеся представителями родов Esherichia, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella, Serratia.
Род Esherichia.
Прямые палочки 1,1 – 1,5 * 2,0 – 6,0 мкм (живые) или 0,4 – 0,7 * 1,0 – 3,0 мкм (высушенные и окрашенные). Встречаются отдельно или в парах. Подвижные или неподвижные.

Хорошо растут на простых питательных средах.

Морфология колонии:

На питательном агаре могут быть гладкими, слабовыпуклые, влажные с блестящей поверхностью, с ровным краем, сероватые или шероховатые и сухие. Могут встречаться слизистые формы.

В качестве источника углерода используется ацетат. Глюкоза и другие углеводы сбраживаются с образованием пирувата, который затем превращается в молочную, уксусную и муравьиную кислоты. Некоторые штаммы не газообразующие. Лактоза сбраживается большинством штаммов.

Типовой вид: Escherichia coli.
Род Citrobacter.
Подвижные палочки. Хорошо растут на обычных средах, могут использовать цитрат, как единственный источник углерода. Глюкозу и другие углеводы сбраживают с образованием кислоты и газа (СО2 и Н2 в соотношении 1:1).

Лактозу иногда не сбраживают.

Способны расти в тетратионатном бульоне Мюллера, селенитном бульоне Лейфсона, Na – дезоксихолатно-цитратном агаре, среде Уилсона и Блэра, агаре с бриллиантовым зеленым или феноловым красным.

Данные среды ингибируют или замедляют рост Е. coli.

Являются обычными представителями кишечной микрофлоры человека.

Определенные серотипы встречаются при массовых пищевых токсикоинфекциях, инфекциях среднего уха, мозговых оболочек и т.д.

Типовой вид: Citrobacter freundii.

Род Enterobacter.

Подвижные палочки. Могут использовать цитрат и ацетат в качестве единственного источника углерода. При 370С сбраживают глюкозу с образованием кислоты и газа (СО2 : Н2 = 2:1). При 44,50С газ из глюкозы не образуется. Тест с метиловым красным – отрицательный. Большинство штаммов медленно разжижают желатин.

Типовой вид: Enterobacters cloacae.
Род Serratia.
Подвижные палочки. Могут использовать цитрат и ацетат в качестве единственного источника углерода. Многие штаммы образуют розовый, красный или фуксиновый пигмент.

Глюкозу сбраживают с выделением небольшого количества газа или без его образования. Тест с метиловым красным – отрицательный.

Типовой вид: Serratia marcecens.

Род Klebsiella.
Неподвижные палочки, 0,3 – 1,5 * 0,6 – 6,0 мкм, одиночные, в парах или коротких цепочках. Растут на средах с мясным экстрактом.

Морфология колоний: куполообразные блестящие колонии различной степени липкости в зависимости от штамма и состава среды.

В качестве единственного источника углерода может использоваться цитрат и глюкоза, а аммиак – как источник азота.

Глюкоза сбраживается с образованием кислоты и газа (СО2 больше чем Н2). Оптимальная температура роста 35-370С, рН оптимум около 7,2. Штаммы Klebsiella устойчивы к пенициллину в стандартных дозах, но к высоким концентрациям могут быть чувствительны. Чувствительны к ампициллину, стрептомицину, тетрациклину, неомицину, канамицину и др.

Типовой вид: Klebsiella pneumoniae.
Лабораторная работа № 2.
Определение бактерий группы кишечных палочек БГКП (колиформных бактерий).
Сущность метода.
Метод основан на способности БГКП сбраживать лактозу при высеве в среду Кесслер.

При исследовании сухих продуктов, подвергающиеся различным способам термической обработки перед употреблением (то есть разведение кипяченой водой (85±1)0С и выше, доведения до кипения и т.д.), биологически активные добавки (БАД), стерилизованные кисло-молочные (сухие и жидкие), а также пастообразные продукты (в том числе продукты детского питания), а также составляющие их компоненты, определение БГКП проводят без предварительной инкубации.

Сухие продукты, предназначенные для детей с первого дня жизни, а также некоторые виды продуктов функционального питания, употребляемые после восстановления при (37±1)0С и (70±1)0С, перед посевом должны подвергаться предварительной инкубации в разбавленном фосфатном буферном растворе для восстановления физиологических свойств бактерий, поврежденных в процессе технологической обработки продукта.
Посев с предварительной инкубацией сухих молочных продуктов для детского и функционального питания.
Асептически взвешивают 1 г. сухого продукта и вносят в пробирку с

9,0 см3 разбавленного фосфатного буфера для предварительного обогащения. Взвесь тщательно перемешивают, проверяют значение рН при помощи индикаторной бумаги. При необходимости активную кислотность доводят до рН = 7 ед., используя стерильные растворы 1н гидроокиси натрия или 1 н соляной кислоты.

Колбы с исследуемым материалом термостатируют при температуре (37±1)0С в течение 24 часов. После чего проводят засев 1,0 см3 проинкубированной взвеси исследуемого продукта в пробирку с 10,0 см3 среды Кесслер лактозой.

Если в исследуемом продукте (прямых посевах или посевах с предварительной инкубацией) отсутствуют признаки роста – газообразование или помутнения среды, дают заключение об отсутствии БГКП (колиформных бактерий). При наличии признаков роста, из колб или пробирок, где наблюдается газообразование или помутнение среды Кесслер с лактозой, производят высев на чашки со средой Эндо или Левина.

Прямой посев.
Посев производят микробиологической петлей из каждой пробирки так, чтобы получить рост изолированных колоний. Для этого чашки Петри со средой визуально разбивают по секторам и проводят посевы отдельно на каждый сектор, или на отдельные чашки. Чашки с посевом термостатируют при температуре (37±1)0С от 18 до 24 часов.

При определении E. Coli пробирки с исследуемым продуктом в среде Кесслер с лактозой термостатируют при температуре (44±1)0С в течении (24±1) часов. А при наличии признаков роста подвергают аналогичному дальнейшему исследованию.
Учет результатов.
При отсутствии на среде Эндо или Левина колоний типичных для БГКП (колиформных бактерий) засеянная навеска продукта считается незагрязненной ими, то есть исследуемый продукт соответствует нормативу.

При наличии на средах типичных для БГКП колонии, для делают препараты, окрашивают их по Граму и микроскопируют (см. метод микроскопирования).
Типичные колонии БГКП.

Среды

Характеристика БГКП колоний

Эндо
Левина

Красные с металлическим блеском или без него; розовые и бледно-розовые.

Черные с металлическим блеском; темные с черным центром; сиреневые с темным центром



При обнаружении грамотрицательных не содержащих спор палочек указывает на наличие БГКП (колиформных бактерий) в анализируемой массе продукта и несоответствие продукту микробиологическому нормативу.

Если в результате микроскопирования, подтверждается наличие E. Coli в исследуемом продукте, то все типичные колонии подвергают идентификации по ИМАЦ- тестам (реакция на индол, реакция Фогес – Проскауэра, реакция с метиловым красным, утилизация цитратов).
Типичные колонии E. Coli

Среды

Характеристика колоний E. Coli

Эндо
Левина

Красные с металлическим блеском или без него; розовые.

Черные темно-коричневые с темным центром, с металлическим блеском или без него.


При обнаружении в 10 г. продукта бактерий родов Enterobacter и Citrobacter, но при отсутствии БГКП (колиформных бактерий) в 1 г. продукта, продукт браковке не подлежит.

Обнаружение на среде Эндо колоний с желтым или желто-коричневым оттенком при анализе сухих молочных каш, содержащих в качестве компонента рисовую или гречневую муку, овсяное молоко, манную крупу, указывает на принадлежность выделенных бактерий к роду Erwinia. В этом случае (при отсутствии пигментных микроорганизмов для БГКП) исследуемый продукт считается соответствующий нормативу на БГКП (колиформные бактерии). Так как бактерии рода Erwinia являются представителями эпифитной микрофлоры зерновых культур и не обладают патогенностью для человека. Для идентификации бактерий рода Erwinia, выросших на среде Эндо, их пересевают на питательный агар с 5% сахарозы, на котором они дают мукоидный рост не свойственный БГКП.

Метод микроскопирования.
Сущность метода.
Метод основан на просмотре окрашенных препаратов под микроскопом для ориентировочной характеристики морфологии.
Проведение анализа.
На чистое предметное стекло наносят микробиологической петлей небольшую каплю исследуемого материала и распределяют на площади приблизительно 1 см2. При исследовании пастообразных продуктов или агаровой культуры на стекло наносят каплю стерильной воды, а затем вносят в нее петлей продукт, тщательно перемешивают и растирают на площади 1 см2.

Препарат высушивают при комнатной температуре, фиксируют на пламени горелки и красят метиленовым голубым или раствором карболового кристаллического фиолетового (окрашивают по Граму). Далее микроскопируют.


Запись в лабораторном журнале.
1. Наименование продукта и НД Овсяные хлопья «Минутка»

ТУ 9294-004-00867213-99

2. Возраст детей
3. Дата выработки продукта 24.01.03 г. партия № 2110024

№ партии

  1. Микробиологические нормативы Масса продукта в (г) в которой

По БГКП (колиформные бактерии) допускается БГКП – 0,1 гр.
5. Количество пробы и № 10 г. проба №2
6. Обработка перед употреблением восстановлен при t = 700С в

течение 1 мин.
7. Результаты исследований БГКП не обнаружены.


Вопросы для самопроверки.


  1. Характеристика семейства Enterobacteriaclae. Характеристика родов группы БГКП.

  2. Сущность метода определения БГКП.

  3. Приготовление разведений продуктов для посев. Какие виды посевов существуют при определении БГКП впродуктах детского и функционального питания?

  4. Морфология колоний БГКП, E. Coli на средах Эндо и Левина.

  5. Сущность метода микроскопирования.


Микроорганизмы порчи пищевых продуктов.
Наиболее часто в пищевых продуктах возбудителями порчи являются грибы класса Ascomycytes, плесневые грибы родов Aspergillus и Penicillium, которые размножаются кондициями.

Виды рода Aspergillus: Asp. glaucus – серо-зеленого цвета, Asp. fymigatum – голубого цвета; Asp. niger – черного цвета.

Грибы рода Penicillium вызывают образование на пищевых продуктах зеленой кистевидной плесени. Осыпаясь, кондиции грибов образуют на продуктах сизую пыль. Кондиции Penicillium находятся в воздухе, на плодах, солоде, раздавленных зернах и т.п.

Грибы вида Rhizopus – вызывают черную плесень. Пищевые продукты пораженные этой плесенью, затягиваются паутинообразным мицелием.

Плесень пищевых продуктов вызывают и многоклеточные микроорганизмы – грибы класса Fungi imperfecti. В виде бархатистой белой пленки, встречающейся на поверхности квашеных овощей, молочно-кислых продуктов, сливочного масла, сыра – грибы вида Oidium.

На различных пищевых продуктах: яйца, мясо, сыр и т.д. грибы рода Cladosporium образуют черные пятна.

Микробиологические нормативы для сухих кисло-молочных продуктов регламентируют содержание плесневых грибов не более 50 КОЕ/г; для сухих молочных каш – не более 200 КОЕ/г; для компонентов, используемых в производстве продуктов детского питания – не более 50 и 100 КОЕ/г, за исключением: витаминных премиксов, соевого масла, кукурузного масла – не более 20 КОЕ/г; сахара-песка рафинированного, молочного сахара, овсяного толокна, рисовой, гречневой, овсяной, пшеничной и ячменной муки – не более 10 КОЕ/г; в крупах допускается содержание плесневых грибов – не более 200 КОЕ/г.

Не менее серьезную проблему для различных областей пищевой промышленности представляют одноклеточные микроорганизмы – дрожжи класса Ascomycetes. Так к снижению качества сахаросодержащих напитков, соков и нарушению технологического процесса приводят дрожжи вида Candida. При развитии в соках (в результате не герметичной укупорке) они образуют белую или сероватую пленку, вызывая изменение вкуса и цвета.

Дрожжи семейства Saccharomyces – сбраживают углеводы, вызывая помутнение напитков и порчу вкуса.

Дрожжи семейства Schizosaccharomyces в сахаросодержащих средах вызываю энергитичное брожение, образуя до 12% спирта.

Развиваясь в плодово-ягодных соках, способны понижать кислотность вследствие разрушения яблочной кислоты до СО2 и Н2О.

Дрожжи рода Pichia размножаются так же на поверхности сахаросодержащих жидкостей, образуя летучие кислоты, придавая продукту лекарственный привкус. В процессе разлива, попадая в продукт вызывают помутнение.

Дрожжи рода Torulopsis, так же вызывают помутнение напитков, а в сусле образуют слизи и т.д.

Таким образом, микробиологические нормативы строго регламентируют содержание дрожжей: для сухих молочных продуктов детского питания – не более 10 КОЕ/г; для сухих кисломолочных продуктов – не более 10 КОЕ/г; для жидких кисло-молочных пастообразных продуктов детского питания наличие дрожжей не допускается; в сухих молочных диетических продуктах должно не превышать – 50 КОЕ/г.

Содержание дрожжей в сухих молочных кашах – не более 100 КОЕ/г;
Методы анализа по определению микроорганизмов порчи пищевых продуктов.


Характеристика дрожжей и плесневых грибов.


Группа микроорганизмов

Характеристика


Дрожжи

Плесневые грибы

Одноклеточные микроорганизмы, клетки круглой, овальной или продолговатой формы, длинной от 2,5 до 30 мкм и шириной от 2,5 до 10 мкм, часто почкующиеся.
Состоят из нитей-гифов, без перегородки или сентированных на клетки. Гифы образуют боковые выросты и разветвления, от вегетативных гифов поднимаются гифы, несущие плодовые тела.



Лабораторная работа № 3
Определение количества дрожжей и плесневых грибов.
Сущность метода.
Метод основан на количественном подсчете числа колоний дрожжей и плесневых грибов, вырастающих на плотных питательных средах с антибиотиками при температуре (24±1)0С в течение 5 суток при посеве исследуемого продукта.
Методика определения.
Из каждой пробы используемого продукта делают посев по 1,0 см3 разведений 1:10; 1:100 на две чашки Петри со средой Сабуро. Чашки Петри должны быть заранее промаркированы и залиты охлажденной до 450С средой в количестве 14,0 см3. После высева разведений продукта на среду, чашки закрывают крышками и тщательно перемешивают, оставляя для застывания при комнатной температуре.

Затем их термостатируют при температуре (24±1) 0С в течение 120 часов, предварительным учетом через 70 часов. Количество колоний дрожжей и плесневых грибов подсчитывают раздельно.

Колонии дрожжей имеют беловато-желтый цвет, сметанообразующую консистенцию, перламутровый оттенок и куполообразное возвышение.

Колонии плесневых грибов имеют пушистый мицелий, напоминающий вату. Окраска варьирует.

Для количества подсчета отбирают чашки на которых выросло от 15 до 150 колоний дрожжей и/или от 5 до 50 колоний плесневых грибов.

При необходимости проводят микроскопирование.
Учет и обработка результатов.
Результаты исследований пересчитывают отдельно для дрожжей и плесневых грибов. Количество дрожжей и плесневых грибов в 1,0 см3 или в 1 г. продукта вычисляют по формуле:
X = n · 10 m, где
n – количество колоний, подсчитанных на чашке Петри.

m – число десятикратных разведений.

За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое значение, полученное по всем чашкам, и выражают в КОЕ/г. или КОЕ/см3.

При обнаружении в 1 г. исследуемого продукта количества дрожжей и/или плесневых грибов, превышающих нормативы, партия продукта подлежит повторному микробиологическому анализу с удвоенным количеством образцов.
Запись в лабораторном журнале.
Наименование продукта Сухой кисломолочный продукт

«Бифидолакт»
Вес и № пробы 2 гр. №……..
Возраст детей с первых дней жизни до 1 года.
Обработка перед Восстановление при 45 – 500С

употреблением


Микробиологические Плесневые грибы – не более

нормативы 50 КОЕ/г. Дрожжи – не более

10 КОЕ/г;

Результаты исследований: …………………………………

Вопросы для самопроверки.


  1. Какие виды плесневых грибов и семейства дрожжей наиболее часто встречаются в пищевых продуктах?

  2. Характеристика групп микроорганизмов, вызывающих порчу пищевых продуктов.

  3. Сущность метода определения количества дрожжей и плесневых грибов.

  4. В каких случаях проводят повторные микробиологические анализы с удвоенным содержанием образцов?

  5. Какие санитарно – гигиенические требования предъявляют к предприятиям по производству продуктов детского питания?


Пробиотическая микрофлора в продуктах детского и функционального питания.
В зависимости от состава микрофлоры продукт детского и функционального питания могут выпускаться следующих видов:

- кисломолочные продукты, содержащие молочнокислые палочки и стрептококки, бифидобактерии, единичные дрожжи;

- продукты функционального питания на зерновой и растительной основах, содержащие в своем составе биомассу бифидобактерий, лактобактерий, ацидофильных бактерий;

- биологически активные добавки, включающие в своем составе так же пробиотическую микрофлору.

Эубиотики (пробиотики), находящиеся в составе этих продуктов, являются представителями нормальной микрофлоры кишечника, к ним относятся бифидобактерии и молочнокислые микроорганизмы рода Lactobacterium. Их называют классическими пробиотиками.

В последнее время проводится поиск новых штаммов с наиболее выраженными свойствами. Помимо лактобацилл иммуностимулирующим действием в результате повышения неспецифической резистентности обладают микроорганизмы: Lactococcus, Enterococcus, Micrococcus, Streptococcus, Bifidobacterium, Propionibacterium, Eubacterium, Saccharomyces boulardii и Bacillus.

На их основе создаются биопрепараты и новые виды кисломолочных продуктов.
Род Bifidobacterium.
Грамположительные, не кислоустойчивые, не образующие спор, неподвижные бактерии.

Морфологические признаки:

Чрезвычайно вариабельные по внешнему виду палочки. Для свежевыделенных штаммов характерны прямые или разветвленные палочки, Y- или V- формы, булавовидные или лопатовидные формы.

На морфологию могут влиять условия питания, при пересевах прямые и изогнутые палочки неравномерной ширины могут иметь изломы. Газа не образуют. Глюкоза сбраживается до уксусной и L-(+) молочной кислот. Масляная, пропионовая кислоты и СО2 не образуются.

Анаэробы, хотя в присутствии СО2 изредка могут быть толерантными к кислороду. Оптимальная температура роста 36-380С.

Типовой вид: Bifidobacterium bifidum.

Виды рода Bifidobacterium:

В. bifidum; B. adolescentis; B. infantis; B. liberorum; B. lactentis; B. breve;

B. parvulorum, B. suis; B. longum; B. pseudolongum; B. thermophilum;

B. asteroids; B. indicum; B. coryneforme; B. longum subsp. animalis.
Все бифидобактерии сбраживают глюкозу, галактозу, фруктозу.
Род Lactobacterium.
Прямые и изогнутые грамположительные палочки длинной от 0,7 до 3,0 мкм, расположенные беспорядочными скоплениями и отдельными короткими цепочками. Жгутиков не имеют. Капсул и спор не образуют. Анаэробы и факультативные анаэробы. Становятся грамотрицательными при повышении кислотности.

У некоторых штаммов выявляются зернистость содержимого клетки или полосатость при окраске по Граму или метиловым синим.

Метаболизм – бродильный, хотя могут расти на воздухе, некоторые - ------ анаэробы.

Характерная черта – способность расщеплять сахара; при сбраживании глюкозы рН снижается на одну и более единиц. Поверхностный рост усиливается на твердых средах при анаэробиозе и 5-10% СО2 . Температурные пределы: 15-450С. Кислотолюбивые, рН 5,5 – 5,8 и менее растут при рН = 5,0. Тип молочнокислого брожения. Сбраживают рибозу. Образуют D-L – молочную кислоту из глюкозы.
Гомоферментативные растут при 450С, не растут при 200С и ниже:

L. delbruecbii; L. leichmannii; L. jensenii; L. lactis; L. bulgaricus;

L. helveticus; L. acidophilus; L. plantarum; L. casei; L.curvatus; L. casei subst. preudoplantarum.

Не вызывают газа из глюкозы, рибозу не сбраживают, образуют D-L- молочную кислоту.
Гетероферментативные – из глюкозы образуют молочную кислоту со значительным количеством СО2, уксусной кислоты и этанола; из фруктозы – манит.



L. fermentum – рост при 450С, нет роста при 150С.

L. cellobiosus – рост и при 450С, и при 150С.
Не растут при 45 0С, рост наблюдается при 150С: L. brevis; L. buchneri;

L. coprophilus; L. viridescens.

Лабораторная работа № 4.
Определение количества бифидобактерий.
Сущность метода.
Метод основан на способности бифидобактерий расти в питательных средах, разлитым высоким столбиком в пробирках при температуре (37±1) 0С и образовывать в них через 24 – 72 часа гвоздикообразные характерные колонии.

Методика определения.
Готовят десятикратные разведения продукта. Причем, перемешивание продукта производят способом, исключающим попадание воздуха в пробирку.

Перед посевом разведений, среды в пробирках следует разогреть в кипящей водяной бане до полного расплавления агара и появления на поверхности пузырьков. Далее выдержать их в течение 20 минут, а перед посевом остудить до температуры 450С, погружением в холодную воду.

Из приготовленных разведений исследуемого продукта делают посевы по 1,0 см3 в два параллельных ряда пробирок с питательной средой. Для каждого посева (пробирки) берут отдельную пипетку.
Инкубация.
Посевы выдерживают в термостате при температуре (37±1) 0С в течение (72±1) часов.


Учет и обработка результатов.
Подсчет количества клеток бифидобактерий в 1 см3 (1г.) продукта производят путем умножения числа выросших колоний на соответствующее разведение.

а10n + a10n+1

Х= ----------------------10;

2
где: Х – количество колонеобразующих единиц лактобактерий в 1,0 г исследуемого продукта;

а1, а2 – среднее арифметическое значение количества колоний в каждом учитываемом разведении;

10 – поправочный коэффициент на объем исследуемого образца.

За окончательный результат анализа принимают среднее арифметическое значение результатов, полученных в двух параллельных посевах.

Лабораторная работа № 5.
Определение жизнеспособных клеток Lactobacterium в продуктах функционального питания не на молочной основе и БАД к пище.
Сущность метода.
Метод основан на высеве определенных разведений исследуемого продукта из физиологического раствора в среду МРС – 4, культивирование посевов при оптимальных условиях и, при необходимости, определения морфологических свойств обнаруженных микроорганизмов, а так же их подсчете.
Методика определения.
Для определения жизнеспособных клеток 1,0000 г или см3 исследуемого продукта растворяют в колбе вместимостью 250 см3 в 100 см3 0,9%-ного раствора хлорида натрия и перемешивают путем встряхивания суспензии в течение 5 минут. Таким образом, получают разведение биомассы 10-2. Из 2-го разведения (10-2) образца стерильной пипеткой переносят 1см3 суспензии в пробирку с 9 см3 0,9 %-ного раствора хлорида натрия, тщательно перемешивают, набирая раствор из пипетки от 5 до 10 раз. Таким образом, получают третье разведение (10-3) исследуемого образца. Эту операцию повторяют до получения требуемого разведения .

При приготовлении разведений используют каждый раз отдельно взятую стерильную пипетку, вводя ее в пробирку выше уровня ее дна от 2 до 3 см. Время от момента приготовления разведения до посева не должно превышать 30 минут.
Посев на чашки Петри

Перед посевом маркируют 4 чашки Петри, используемые для параллельных определений. На каждые 2 чашки карандашом по стеклу ставят номер разведения и дату посева.

Для посева используют два параллельных ряда чашек Петри со средой МРС-4, предварительно подготовленных по ГОСТ 26670.

Из 2-х последних разведений образцов на поверхность питательной среды наносят в каждом случае отдельной, стерильной пипеткой по 0,1 см3 микробной суспензии. Пипетку с посевным материалом держат под углом 450. Затем микробную суспензию растирают шпателем Дригальского по поверхности питательной среды.

Посевы термостатируют при температуре (37±1)0С в течение (44±4) ч.

Учет и обработка результатов


По окончании инкубации производят подсчет выросших колоний на перевернутой вверх дном чашки, помещая ее на темном фоне, пользуясь лупой с увеличением от 4 до 10 раз.

Каждую подсчитанную колонию отмечают на дне чашки чернилами или фломастером.

При подсчете учитывают чашки Петри, на которых выросло от 30 до 300 колоний. Результат выражают в колонеобразующих единицах лактобактерий в 1,0 г исследуемого продукта.

Пример: В 1,0 г продукта функционального питания должно быть 107 КОЕ лактобактерий. Тогда результат вычисляем с учетом двух последних разведений продукта:

где: Х – количество колонеобразующих единиц лактобактерий в 1,0 г исследуемого продукта;

а1, а2 – среднее арифметическое значение количества колоний в каждом учитываемом разведении;

10 – поправочный коэффициент на объем исследуемого образца.

Если в 1,0 г продукта определяется менее 105 КОЕ ( в соответствии с требованиями СанПиН 2.3.2.1078-01), то контроль повторяют на удвоенном количестве образцов. Если в повторном контроле в 1,0г определяется менее 10 КОЕ, то серию продукта бракуют.


Методика определения содержания бифидобактерий в смешанных с молочно-кислыми бактериями в продуктах.
Определение проводится аналогично определению бифидобактерий. Однако в среду вносят стерильный раствор неомицина.
Приготовление раствора неомицина.
50,0 г. неолицина (сульфата или основания) растворяют в 500,0 см3 дистиллированной воды. Массовая концентрация неолицина в растворе 100 г/дм3.
Применение селективной среды для определения количества бифидобактерий в продуктах, в микрофлоре которых присутствуют молочно-кислые бактерии.
Применяют гидролизатно- молочную или кукурузно-лактозную среды с увеличенной массовой долей агара – 17,0 гр. На 1,0 дм3 питательной среды. Среды разливают в широкие пробирки по (20,0 ± 0,5)см3 и стерилизуют. В готовые среды перед вносят 0,2 см3 раствора неолицина из расчета на 20 см3 среды.
Учет и обработка результатов.
При определении истинного количества бифидобактерий в среде с неолицином результат следует удвоить.


На предприятиях, выпускающих продукты со специфической микрофлорой с пролонгированным сроком годности, проводят исследования по выживаемости пробиотической микрофлоры в течение всего периода хранения. Для этого исследуют содержание бифидобактерий, лактобацилл в свежевыработанных образцах продукта, в течение всего срока хранения с некоторой периодичностью, и в конце срока годности продукта.
В результате проводимых исследований изучают динамику сохранности или изменения титра жизнеспособных клеток пробиотических культур в процессе хранения. Подобные исследования позволяют определить правильность ведения технологических процессов производства, режимов хранения, совместимости рецептурных композиций с пробиотической микрофлорой и другие аспекты.

Результаты исследований продуктов на соответствие микробиологическим нормативам безопасности оформляются в лабораторных журналах следующим образом:


Наимено-вание продукта

Масса продукта (г) в которой не обнаружены:

B.

сereus
КОЕ/г

Плес-не-

вые грибы

КОЕ/г

Дрож-жи
КОЕ/г

Ацидофильные бакте-рии

КОЕ/г

Бифи-доба-ктерии


КОЕ/г

Молочно-кислые бакте-рии

КОЕ/г

БГКП

(коли-форм-ные бакте-рии)

Е.coli

Патогенные микро-

организмы в.т.ч. Salmonella

S.areus

«Тонус -1»

кисломолочный продукт сухой.

1,0

10,0

100,0

10,0

100

50

10

1·106

1·107

-



Вопросы для самопроверки


  1. Что означает термин «пробиотики»?

  2. Характеристика рода Bifidobacterium, рода Lactobacterium.

  3. Сущность методов определения бифидобактерий, лактобактерий. Сравнительная характеристика.

  4. Перечислите оптимальные условия культивирования посевов при определении Lactobacterium и Bifidobacterium.

  5. Какие питательные среды применяют для культивирования посевов при определении бифидобактерий в продуктах на молочной и немолочной основах.



Специальные питательные среды и реактивы.


  1. Среда для определения КМАФАМ промышленного производства по ТУ 49513-83 или ТУ 10-02-02-789-177-94.

Подготовку среды проводят согласно прописи на этикетке.

  1. Среды и реактивы для определения БГКП и Е. coli.

    1. Среда Кесслер (с лактозой) промышленного производства по

ТУ 10.02.875-90.

    1. Среды Эндо, Левина по ФС 42-186-ВС-88.

    2. Разбавленный фосфатный буферный раствор готовят из концентрированного фосфатного и буферного раствора.

Пипеткой, вместимостью 2 см3, вносят 1,25 см3 концентрированного фосфатного буферного раствора в мерную колбу, вместимостью 1000 см3 и доводят объем дистиллированной водой до метки, рН должно быть (7,1±0,1)ед.

Затем разливают по пробиркам, закрывают ватным тампоном и стерилизуют в автоклаве при t = (121±1)0С в течение (30±1) мин.


    1. Концентрированный фосфатный буферный раствор.

34 г. однозамещенного фосфорнокислого калия растворяют в 500,0 см3 дистиллированной воды в мерной колбе, вместимостью 1000,0 см3. Устанавливают рН = (7,2±0,1) ед. 1н. раствором гидроокиси натрия и доводят дистиллированной водой до 1000,0 см3. Хранят в емкости, укупоренной резиновой пробкой, в холодильнике не более 30 суток.

2.5. Раствор метиленового голубого для окраски препаратов.

К 30,0 см3 спиртового раствора метиленового голубого прибавляют 100,0 см3 дистиллированной воды и 1,0см3 раствора гидроокиси калия с массовой концентрацией 10 г/дм3.


  1. Среды для определения дрожжей и плесневых грибов.




    1. Среда Сабуро.

    2. Среда для определения дрожжей и плесневых грибов в молочных продуктах промышленного производства по

ТУ 49 1059-84.

    1. Приготовление раствора неолицина. 500 мл. неолицина вносят в стерильную мерную колбу, вместимостью 100 см3, добавляют 10.0 – 20,0 см3 дистиллированной воды (стерильной) при t = 35-400С, перемешивают до растворения, затем доливают стерильной дистиллированной водой до метки. Массовая концентрация неолицина в растворе 5 г/дм3. Дистиллированную воду стерилизуют в колбах при (121±1)0С в течение (20±1) минут.

  1. Среды и реактивы для определения количества бифидобактерий и лактобацилл.

    1. При посеве образцов молочно-кислых продуктов, содержащх бифидобактерии, используют кукурузно-лактозную, гидролизатно-молочную сферы.

При посеве образцов, продуктов не на молочной основах, содержащих бифидобактерии, посев осуществляют в среде Блаурокка, промышленного производства.

Для определения количества лактобацилл используют среду МРС – 4, промышленного производства.

    1. Для разведений продуктов не на молочной основах используют физ. Раствор NaCl.

Для нейтрализации проб кисло-молочных продуктов и заквасок используют раствор двууглекислого натрия.

В 1000,0см3 дистиллированной воды растворяют 20 г. трехзамещенного лимоннокислого натрия, разливают в пробирки по 10,0 см3 и колбы по 93,0 см3 и стерилизуют при (121±1)0С в течение (20±1) мин.

Литература:


  1. Беляев Е.Н., Тушельян В.А. Качество и безопасность продуктов детского питания в России: медико-биологические требования и результаты мониторинга // Вопросы питания, 1996 №5 – с. 8-12.

  2. Руководство по методам анализа качества и безопасности пищевых продуктов // Под. Ред. И.М. Скурихина, В.А. Тутельяна, - М.: Брандесс Медицина, 1998 – 342 с.

  3. Нецепляев С.В., Панкратов А.Я. Лабораторный практикум по микробиологии пищевых продуктов животного происхождения. – М.: Агропромиздат, 1990 – 222 с.

  4. Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов. Санитарные правила и нормы СанПиН 2.3.2.1078 – 01. – М., 2001 г.

  5. Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества. Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы СанПиН 2.1.4.1074-01.-М., 2002 г.

  6. Санитарно – микробиологический анализ питьевой воды. МУ 4.2.1018 – 01.-М., 2001 г.

  7. Методы микробиологического контроля продуктов детского, лечебного питания и их компонентов. МУК 4.2.577-96., М-1998 г.

  8. Краткий определитель бактерий Берги. Под ред. Хоулта, чл.кор АН СССр Г.А. Заварзина том 1,2. Изд. «Мир», М., -1980 г.

  9. Микробиология молока и молочных продуктов. Учебник для ВУЗов. –Сергиев Посад ООО»Все для Вас – Подмосковье», 1999.-415с.

  10. Основы микробиологии и гигиены молока и молочных продуктов. Издание второе, переработанное и дополненное. Москва «Легкая и пищевая промышленность» 1984



Содержание.
Введение…………………………………………………………………2
Основные требования к проведению

микробиологического контроля………………………………………..3
Методы отбора проб сырья,

компонентов и готовой продукции………………………………….....4
Подготовка проб к анализу …………………………………………….4
Приготовление разведений

продуктов для посева……………………………………………………5
Методы анализа продуктов детского

и функционального питания…………………………………………….6
Лабораторная работа № 1

Определение КМАФАМ………………………………………………...7
Лабораторная работа № 2

Определение БГКП (колиформных

бактерий)…………………………………………………………………12
Лабораторная работа № 3

Определение количества дрожжей

и плесневых грибов……………………………………………………...17
Лабораторная работа № 4

Определение количества жизнеспособных

клеток бифидобактерий………………………………………………….22
Лабораторная работа № 5

Определение жизнеспособных

клеток лактобацилл………………………………………………………23
Методика определения содержания

бифидобактерий в смешанных с

молочно-кислыми бактериями в продуктах…………………………….25
Список питательных сред………………………………………………..27
Литература………………………………………………………………...29




Скачать файл (186 kb.)

Поиск по сайту:  

© gendocs.ru
При копировании укажите ссылку.
обратиться к администрации
Рейтинг@Mail.ru